重组蛋白具有极高的经济价值和科研价值,但是在哺乳动物细胞中使用稳定转染方法将会消耗大量的时间,而传统的瞬时转染方法,在产量上也难以令人满意。所以重组蛋白大规模的瞬时表达技术是近年来的一个研究热点,已有报道能放大到 100L反应器中生产重组蛋白,产量(分泌型蛋白)可达 1-10mg/L。不过该方法技术条件要求高,如质粒的纯度、转染的效率等。哺乳动物细胞表达系统中,重组蛋白的表达水平与许多 因素相关,如转录和翻译调控元件、RNA剪接过程、mRNA稳 定性、基因在染色体上的整合位点、重组蛋白对细胞的毒性作 用以及宿主细胞的遗传特性等。重组蛋白的活性高低,是实验成功的关键。小鼠EGF重组蛋白定制
如果一个实验周期长于一周,或配制的细胞因子或重组蛋白一次用不完,我们就需对细胞因子或重组蛋白进行长期保存。千万不能将重组蛋白冻干粉用推荐的溶液重悬后直接分装冻存于-20℃至-80℃。塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用,也就是说溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。直接分装冻存,则溶液中的大部分细胞因子或重组蛋白均会粘附到管壁上,导致溶液中实际溶解的细胞因子或重组蛋白的浓度大为降低,表现为细胞因子或重组蛋白活性的下降。正确的方法是:将已重悬的细胞因子或蛋白用含载体蛋白,如0.1% BSA(牛血清白蛋白),10% FBS(胎牛血清),5% HSA(人血清白蛋白)的溶液将重悬液进一步稀释,然后分装冻存于-20℃至-80℃,即常规冰箱的冷冻室或超低温冰箱中。义翘神州TGF-beta 1重组蛋白重组蛋白定制中的注意事项。
重组蛋白是应用了重组DNA或重组RNA技术而获得的蛋白质。用于体外生产重组蛋白的宿主细胞主要是细菌(枯草芽孢杆菌、大肠杆菌)、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞。 生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。重组蛋白已被广泛应用于蛋白结构研究、免疫检测试剂、重组蛋白药物、诊断试剂开发、抗体药物靶点、CAR-T细胞靶点、Fc受体、流感病毒蛋白和细胞因子等大多数热门研究领域。
PeproTech Inc. 创立于1988年,始终致力于为生命科学研究开发重组蛋白及相关产品,如今已成为能提供多种高质量细胞因子和重组蛋白,相应的单克隆、多克隆和生物素标记抗体,以及ELISA试剂盒的世界。PeproTech Inc.的产品涵盖免疫调节蛋白、白介素、集落刺激因子、生长因子、化学趋化因子、干扰素、脂联素、成纤维生长因子、转化生长因子、坏死因子、神经营养素和防御素等诸多生命科学研究领域中重要的生物活性分子。为跟上当今科研发展、满足日益增长的需求,PeproTech Inc.研制出无动物成分的重组蛋白(animal-free recombinant proteins)。这些蛋白是利用专有的无动物成分生产设施,在严格的无动物成分条件下生产出来,因此痕量的动物源性污染引发潜在问题的可能性被降至低,从而完全达到临床前研究用标准。比较热门的重组蛋白主要为重组细胞因子。
上海普欣生物技术有限公司是一家专业从事生物试剂研发、生产和销售的高新技术企业,创立于2006年,总部位于中国上海。其产品和服务涵盖了分子生物学、蛋白化学、细胞生物学、免疫学等生命科学的诸多领域。普欣生物拥有基因克隆,蛋白表达,菌种发酵,蛋白纯化,蛋白冻干以及抗体制备等完整的技术平台,并拥有自己的GMP中试生产车间。开发和生产的重组蛋白细胞因子产品远销海外,已成为国内外多家生物试剂公司和临床诊断公司的OEM供应商。其众多重组蛋白产品被用于研究和临床前试验。2014年,普欣加入了Bio-Techne的大家族。高质量的重组蛋白能提高实验的可重复性与结果的可信度。义翘神州TGF-beta 1重组蛋白
选择合适的重组蛋白表达系统,至关重要。小鼠EGF重组蛋白定制
为了保证重组蛋白良好的稳定性和生物学活性,通常加8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖是一种以两个葡萄糖分子通过 α,α,1,1-糖苷键连接的二糖。海藻糖是一种非还原糖,不与氨基酸或蛋白质发生反应。它本身不存在于哺乳动物体内,但哺乳动物体内却存在分解海藻糖的酶,且海藻糖作为一种小分子的半抗原,哺乳动物对其免疫反应性很低。这使得海藻糖对live实验或异种移植等实验的干扰极小。海藻糖不仅可以防止蛋白在脱水状态下改变其结构,更能在高温、低温、高渗透压的条件下保留蛋白的生物学活性。目前,海藻糖以其高效的蛋白保护性能与相对低廉的价格渐渐代替 BSA,是免疫实验产品和蛋白类产品添加剂的新宠。小鼠EGF重组蛋白定制
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